产品货号:
WH0025
中文名称:
新型植物基因DNA组提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Plant genomic DNA rapid extraction kit
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取多种植物组织中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白。提取的基因组DNA片段大,可达40 kb,纯度高,质量稳定可靠。
产品特点:
·简单快速:1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·无毒害:无需使用酚/氯仿抽提,操作安全。
·纯度高、质量好:100mg植物组织中可提取到3-30μg基因组DNA,OD260/OD280的值在1.7-1.9范围内。
下游应用:
· PCR、qPCR与多重PCR。
· RAPD、RFLP、AFLP、SSR等分子标记。
·文库构建、Southern杂交。
不同植物组织DNA提取得率:(样本量:100mg,OD260/OD280:1.7~1.9)
不同来源的植物材料中基因组会有差异,以上所有材料均为新鲜幼嫩叶片。
提取实例:
本试剂盒提取的各种植物基因组DNA电泳结果。
起始量:100mg叶片,100μl洗脱,3μl上样,琼脂糖凝胶浓度为1%,6V/cm,电泳20min,marker为λDNA/Hind III
1:大豆新鲜幼嫩叶片;
2:烟草新鲜幼嫩叶片;
3:小麦新鲜幼嫩叶片;
4:玉米新鲜幼嫩叶片;
试剂盒组成:
保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.缓冲液LP1可能发黄,并不影响提取效果。
3.若缓冲液LP1或LP2有沉淀析出,可在37℃水浴溶解,摇匀后使用。
4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
使用方法:
使用前请先在缓冲液LP3和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.处理材料:
取植物新鲜组织100mg或干重组织20 mg,加入液氮充分碾磨。加入400μl缓冲液LP1和6 μl RNase A(10 mg/ml),旋涡振荡1 min,室温放置10min。
2.加入130 μl缓冲液LP2,充分混匀,旋涡振荡1 min。
3.12000rpm(~13400×g )离心5 min,将上清移至新的离心管中。
4.加入1.5倍体积的缓冲液LP3(例如500 μl的上清液加750 μl缓冲液LP3)(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),立即充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g )离心30 sec,倒掉废液,吸附柱CB3放入收集管中。
6.向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
注意:如果吸附柱膜呈现绿色,向吸附柱CB3中加入500 μl无水乙醇,12000rpm(~13400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7.重复操作步骤6.
8.将吸附柱CB3放回收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
9.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g )离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12000rpm (~13400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
DNA浓度及纯度检测:
1.得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3.OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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产品特点:
·简单快速:1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·无毒害:无需使用酚/氯仿抽提,操作安全。
·纯度高、质量好:100mg植物组织中可提取到3-30μg基因组DNA,OD260/OD280的值在1.7-1.9范围内。
下游应用:
· PCR、qPCR与多重PCR。
· RAPD、RFLP、AFLP、SSR等分子标记。
·文库构建、Southern杂交。
不同植物组织DNA提取得率:(样本量:100mg,OD260/OD280:1.7~1.9)
植物材料 | 平均DNA产量 |
拟南芥 | 3~4μg |
小麦 | 25~30μg |
松树 | 25~30μg |
马铃薯 | 4~6μg |
番茄 | 10~15μg |
油菜 | 2~4μg |
烟草 | 20~25μg |
水稻 | 10~25μg |
大豆 | 20~30μg |
玉米 | 20~30μg |
不同来源的植物材料中基因组会有差异,以上所有材料均为新鲜幼嫩叶片。
提取实例:
本试剂盒提取的各种植物基因组DNA电泳结果。
起始量:100mg叶片,100μl洗脱,3μl上样,琼脂糖凝胶浓度为1%,6V/cm,电泳20min,marker为λDNA/Hind III
1:大豆新鲜幼嫩叶片;
2:烟草新鲜幼嫩叶片;
3:小麦新鲜幼嫩叶片;
4:玉米新鲜幼嫩叶片;
试剂盒组成:
组分 | 50T | 200T |
缓冲液LP1 | 25ml | 100ml |
缓冲液LP2 | 10ml | 40ml |
缓冲液LP3 | 21ml | 84ml |
漂洗液PW | 15ml | 50ml |
洗脱缓冲液TE | 15ml | 60ml |
RNase A(10mg/ml) | 300μl | 1.25ml |
吸附柱CB3 | 50个 | 200个 |
收集管(2ml) | 50个 | 200个 |
保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.缓冲液LP1可能发黄,并不影响提取效果。
3.若缓冲液LP1或LP2有沉淀析出,可在37℃水浴溶解,摇匀后使用。
4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
使用方法:
使用前请先在缓冲液LP3和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.处理材料:
取植物新鲜组织100mg或干重组织20 mg,加入液氮充分碾磨。加入400μl缓冲液LP1和6 μl RNase A(10 mg/ml),旋涡振荡1 min,室温放置10min。
2.加入130 μl缓冲液LP2,充分混匀,旋涡振荡1 min。
3.12000rpm(~13400×g )离心5 min,将上清移至新的离心管中。
4.加入1.5倍体积的缓冲液LP3(例如500 μl的上清液加750 μl缓冲液LP3)(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),立即充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g )离心30 sec,倒掉废液,吸附柱CB3放入收集管中。
6.向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
注意:如果吸附柱膜呈现绿色,向吸附柱CB3中加入500 μl无水乙醇,12000rpm(~13400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7.重复操作步骤6.
8.将吸附柱CB3放回收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
9.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12000rpm(~13400×g )离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12000rpm (~13400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
DNA浓度及纯度检测:
1.得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3.OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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